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当CAR-T遇到CRISPR

近年来肿瘤免疫治疗因其显著疗效和创新性备受关注,是肿瘤治疗中蕞具有前景的研究方向之一。CRISPR基因编辑系统的发展以及其在多领域的延伸应用让研究者看到了它的巨大潜力,在肿瘤免疫治疗研究中也显示出广泛的应用前景。在过继性细胞治疗中,主要通过分离患者自身的T细胞进行个体化回输,因受到分离T细胞的数量和异体排斥的影响,不利于大规模临床应用。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建健康人来源的通用型T细胞则可避免这种限制。CRISPR/Cas9可对TCR-TCAR-T细胞的内源性TCR以及HLA-分子的基因进行敲除得到通用型效应细胞。


多基因敲除的研究,基本是在T淋巴细胞上完成的,在CAR-T上进行多基因敲除既要完成基因敲除又要实现CAR-T的表达在技术上实现较为困难。脂质体法、磷酸钙法等常规方法难以实现针对免疫细胞的高效转染。利用病毒载体多次感染带有要敲除的目的基因的sgRNACRISPR/Cas9载体和CAR载体,并且因多次病毒感染细胞活性降低,因此只能用电转才能实现转染载体的目的。

我们来看下肿瘤免疫治疗先驱之一CarlJune教授是怎样实现高效CRISPR编辑T细胞的。201611CarlJune教授在Clinical Cancer Research杂志上发表一篇论文(Multiplexgenome editing to generate universal CAR T cells resistant to PD1 inhibition),在这篇文章的PROTOCOL中详细介绍了如何通过CRISPR/Cas9技术对T细胞进行高效编辑,细胞转染的部分都是通过BTX电转仪实现的。


1. 建立CAR-T细胞


2. TCR的α和β链共转到T细胞


3. CRISPR/Cas9敲除TCR,B2M和PD1,消除CAR-T内源性



阶段,BTX 电穿孔系统由于它的易用性、重复性、高效率和低毒性,为CAR-T和CRISPR等尖端科研提供有力的保障。

高配系统:GeminiX2

·        可电穿孔任何种类细胞-提供方波和指数衰减波两种波形

·        触摸屏使用界面

·        包含“PRESET CRISPR”等预设程序,使用方便

·        海量数据记录,可实现更快优化

·        用户可进行程序完全自定义控制,便于优化

·        可与电极杯、活体镊子电极、高通量电击室等配合使用

经典系统:ECM830

·        灵活而高效的方波电转染系统

·        助力CRISPR技术,诸多文献应用记录

·        可用电压范围广

·        可与电极杯、活体镊子电极、高通量电击室等配合使用


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